El objeto del estudio es conocer el grado de homogeneidad genética de la raza Gallo Combatiente Español a partir de marcadores genéticos basados en la caracterización de secuencias dinucleotídicas repetidas en tándem de ADN genómico. Se trata de una primera prospección sobre una muestra representativa de la población que permitirá conocer si la raza está estructurada en subpoblaciones diferentes genéticamente o, por el contrario, constituye una unidad genéticamente homogénea. Se trata, por tanto, del primer paso para el establecimiento del perfil genético de esta población.
Metodología
Muestreo
Se han recibido en el Laboratorio de Investigación Aplicada 161 muestras de sangre entera de la raza Combatiente Español. Cada una de las muestras se ha identificado mediante un número de laboratorio y las muestras de sangre se han almacenado en tubos de congelación para su posterior conservación. Las muestras proceden de 13 explotaciones diferentes de las provincias de Cádiz, Sevilla y Córdoba. Para completar el estudio se incluyen 10 muestras de gallinas de raza Utrerana, 64 de Sureña, 152 de Extremeña azul y 40 de un cruce industrial de Broiler por Hax.
Tipificación de las muestras
La extracción del ADN de la sangre se realiza sometiendo las muestras de sangre a lavados con una solución tamponada de Tris ClH y EDTA a pH 8 para a continuación proceder a la digestión de los restos celulares con una solución de Proteinasa K (Kawasaki, 1990). Se han amplificado 11 microsatélites propuestos por la FAO para estudios de diversidad (FAO, 2004) (ADL0278, MCW0216, MCW0248, LEI0166, LEI0094, MCW0069, MCW0034, MCW0183, ADL0112, MCW0123, MCW0104) mediante la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la separación por tamaños de los fragmentos obtenidos se ha realizado mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida en un secuenciador automático ABI 377XL (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). El análisis de los fragmentos y la tipificación alélica se ha realizado mediante los programas informáticos Genescan Analisys 3.1.2 y Genotyper 2.5 respectivamente.
Análisis estadístico
Se calculan las frecuencias alélicas de los 11 marcadores seleccionados mediante el programa informático GENETIX versión 4.01(Belkhir, 2004). La Heterocigosidad esperada y observada y el Contenido de Información Polimórfica (PIC) mediante la extensión MS Tools del programa EXCEL (Park, 2001). Se realiza un Análisis Factorial de Correspondencia mediante el programa informático GENETIX versión 4.01. Se calculan las distancias genéticas entre poblaciones usando el algoritmo Da (Nei y cols., 1983). Con la matriz de distancias genéticas se construye un árbol de topología genética con el fin de situar las poblaciones en un espacio y apreciar visualmente sus distancias relativas. Mediante el programa STRUCTURE se lleva a cabo un análisis de agrupamiento y similitud que tiene el potencial de congregar individuos en unidades poblacionales y detectar migrantes sin necesitar una definición a priori de establecer los límites (Pritchard y cols., 2000), una de las salidas del programa es una gráfica donde lo individuos similares genéticamente comparten mayoritariamente el mismo color.
Resultados
En la tabla 1 se recogen las frecuencias alélicas, expresadas en porcentajes, de los 11 microsatélites en raza Combatiente Español. Todos los marcadores han resultado polimórficos habiéndose observado entre 2 y 6 alelos exceptuando el MCW0104 que tan sólo ha presentado un alelo en todos los ejemplares estudiados.
En la tabla 2 se recogen los resultados obtenido del análisis de variabilidad genética de la raza Combatiente Español. Algunos de los marcadores presentan heterocigosidades observadas muy bajas (MCW0123, MCW0248 y ADL0278), Lógicamente el marcador MCW0104 al estar fijado no expresa variabilidad ninguna. Los valores del contenido de información polimórfica se corresponden con las heterocigosidades esperadas indicando que el panel de marcadores empleado, si bien puede incrementarse en estudios posteriores, constituye no obstante, un adecuado referente para una primera valoración del grado de homogeneidad genética de la población.
Se ha realizado un Análisis Factorial de Correspondencia con todos los animales de las cinco razas para ver el grado de dispersión o agrupamiento individual en función de las fórmulas genéticas obtenidas. En la figura 1 se representa el resultado de éste análisis. Se observa un agrupamiento de las razas autóctonas frente al cruce industrial de Broiler por Hax. Las razas ocupan espacios diferentes poniendo de manifiesto que son poblaciones bien diferenciadas, exceptuando la Utrerana que está muy próxima a la Sureña. Hay individuos de la raza Sureña dentro del ámbito del Combatiente Español. Esta circunstancia se debe a que la raza Sureña aún conserva trazas genéticas importantes de las razas ancestrales comunes que dieron origen paulatinamente a las razas autóctonas actuales.
Se observa una gran concentración de las muestras de la Raza Combatiente Español indicando una gran homogeneidad genética y, a su vez, se puede deducir que los caracteres de selección de los reproductores son adecuados. Sin embargo hay ejemplares que pueden proceder de cruces antiguos con diferentes poblaciones de gallinas, básicamente autóctonas, pues como se indicaba anteriormente, el cruce industrial ocupa un espacio propio y alejado de las autóctonas. Ello indica que dentro de la población de Gallo Combatiente Español, aun siendo una población bien conservada hay individuos que son un poco diferentes del resto y son los responsables de aportar la suficiente variabilidad a la raza para que ésta se adapte a las circunstancias cambiantes.
En la figura 2 se representa un árbol de topología genética a partir de las distancias genéticas obtenidas. Se repite la distribución espacial que ya se había observado en las figuras anteriores, a pesar de utilizar algoritmos matemáticos de cálculo muy diferentes. En el árbol de encuentra claramente alejada la población cruzada industrial de las autóctonas y éstas a su vez se encuentran distanciadas por lo que sus diferencias fenotípicas (morfológicas y funcionales) son lo suficientemente diferentes como para considerarse poblaciones independientes.
El la Figura 3 se aprecia la distribución de los individuos por poblaciones cuando se indica al programa que las agrupe en cuatro poblaciones ancestrales. Cada población ancestral es un color y cada barra vertical es un individuo. Cuando un animal procede de diferentes poblaciones ancestrales adquiere colores diferentes, sin embargo cuando un grupo de individuos comparte un origen común y diferenciado comparten mayoritariamente el mismo color. En este caso se aprecia como todos los componentes del la raza Combatiente Español se agrupan juntos compartiendo el mismo color, algo similar ocurre con el cruce industrial Broiler por Hax. Se observa como en el caso de la raza Extremeña hay ejemplares que presentan un color diferente al resto; algo similar ocurre en el grupo formado por las razas Sureña y Utrerana, las cuales comparten un nicho ancestral común (color igual). Este fenómeno es característico de las razas autóctonas que aún no han sido sometidas a un estricto programa de control reproductivo y de conservación genética.
Conclusiones
El gallo Combatiente Español presenta una variabilidad genética alta en base al análisis de marcadores genéticos moleculares. Esta
circunstancia permite diseñar estrategias de selección de reproductores sin un riesgo manifiesto de alcanzar tasas de consanguinidad elevadas.
La pequeña dispersión individual que se aprecia en los análisis indica que la raza posee alguna influencia genética de las poblaciones autóctonas ancestrales que participaron en su formación. Sin embargo esta variabilidad esconde un potencial enorme de selección de reproductores para conseguir los objetivos morfológicos y funcionales que se planteen.
En definitiva, la raza Combatiente Español se configura como una población autóctona de gallinas con estructura genética propia,
situación que debe ser aprovechada por parte de los criadores para la puesta en marcha de un adecuado programa de selección de la raza , para la mejora genética de los caracteres morfológicos y funcionales de la misma, todo ello teniendo como base un control reproductivo adecuado y una selección de reproductores que permita homogeneizar la misma sin caer en la consaguinidad
extrema.
